基本信息
产品名称 | DNA Marker Ⅰ(for PAGE) 分子量标准 | 货号 | P-PR1191 |
规格 | 200次(250ul×4支)、2500次(250ul×50支) | 用途 | 仅供科研 |
英文名称:DNA Marker Ⅰ (for PAGE) Molecular Weight Marker
作用机制:由一系列不同长度的DNA片段组成,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中作为分子量标准,用于判断未知DNA片段的大小;可通过与未知DNA片段的迁移率比较,确定其分子量。
适用样本:PCR产物、酶切产物等DNA片段的PAGE电泳分析,尤其适用于小分子DNA片段的检测。
产品概述
DNA Marker Ⅰ(for PAGE)是一种专为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)设计的DNA分子量标准品,由一系列不同长度的双链DNA片段组成,适用于小分子量DNA片段的分子量判定。PAGE凝胶具有比琼脂糖凝胶更高的分辨率,能够有效分离长度差异较小的DNA片段(如几bp至几百bp)。DNA Marker Ⅰ(for PAGE)的片段大小范围通常覆盖几bp到几百bp,条带清晰、亮度均匀,在PAGE电泳过程中与样本DNA一起分离,通过比对样本条带与Marker条带的迁移位置,可精确确定样本中DNA片段的分子量。该分子量标准品常用于寡核苷酸合成质量检测、小片段PCR产物鉴定、DNA酶切片段分析、核酸适配体筛选等实验,为PAGE电泳中DNA片段的精确分析提供了重要的参考依据。
产品特点
PAGE专用:专为聚丙烯酰胺凝胶电泳优化,适合小分子量DNA片段的精确分析。
片段精细:包含10bp、20bp、30bp……200bp等多个DNA片段,分辨率可达10bp。
条带锐利:各条带清晰锐利,无拖尾,便于精确判断样本片段大小。
浓度均匀:各条带DNA浓度一致,亮度均匀,定量分析更准确。
适用性广:适用于寡核苷酸合成验证、小片段PCR产物鉴定、DNA酶切片段分析等实验。
实验前准备
试剂与耗材检查:确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内,外观无浑浊、沉淀;PCR管、枪头需为无酶无菌规格。
仪器预热:提前10-15分钟启动PCR仪,设置好反应程序,确保仪器达到预设温度。
环境准备:在超净工作台内操作,佩戴无粉手套,避免交叉污染;操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。
反应体系配制
冰上操作:将所有试剂放置于冰盒内,避免酶失活。
体系配比(以25μL体系为例):
PCR预混液(含Taq酶、dNTP、Buffer):12.5μL
上游引物(10μM):1μL
下游引物(10μM):1μL
模板DNA:1-5μL(根据模板浓度调整)
无酶水:补足至25μL
轻柔混匀:用移液器轻轻吹吸混合液3-5次,避免产生气泡;若有气泡可短暂离心去除。
分装体系:将配制好的反应液分装至PCR管中,每管25μL,盖紧管盖。
PCR仪上机反应
程序设置:根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序:
预变性:95℃,3-5分钟
循环阶段:95℃变性30秒,55-65℃退火30秒,72℃延伸(根据片段长度调整,1kb约1分钟),循环25-35次
终延伸:72℃,5-10分钟
保温:4℃。
上机运行:将PCR管放入PCR仪样品槽,确保管盖紧密贴合;启动程序,等待反应完成。
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注意事项
无菌操作:所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理,避免外源DNA污染
温度控制:酶、dNTP等试剂需-20℃储存,避免反复冻融
体系优化:根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度
对照设置:每次实验需设置阴性对照(无模板)和阳性对照(已知阳性模板)
关键字: DNA Marker Ⅰ(for PAG;DNA Marker Ⅰ (for PA;
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