双抗体夹心 ELISA 体系,微孔板固定抗 E-Selectin 捕获抗体,样本内皮活化标志物 E 选择素结合板底,酶标记检测抗体形成夹心结构,洗板显色读数,定量炎症内皮黏附分子水平。
产品参数:
产品名称 | 大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1288 |
英文名称 | Rat E-Selectin ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测灵敏度0.07ng/mL,适配大鼠微量E选择素检测
检测范围:0.1ng/mL - 95ng/mL,覆盖大鼠血管炎症、内皮损伤相关样本浓度
反应时间:总实验时长125分钟,样本孵育65分钟,酶孵育30分钟,显色15分钟,终止5分钟
保存条件:2 - 8℃避光冷藏保存,洗涤液室温存放,标准品密封冷藏
有效期:未开封有效期6个月,开封后1个月内用完
显色系统:稳定型TMB显色系统,显色梯度均匀稳定
检测波长:450nm主波长检测,630nm校正
标准曲线绘制:6点梯度标准品,四参数拟合曲线,R²≥0.995
特异性:特异性识别大鼠E-Selectin,与L、P选择素无交叉反应
重复性:板内CV≤6%,板间CV≤8%,数据稳定
注意事项:血浆样本选用EDTA抗凝,避免肝素干扰;样本采集后及时离心检测;孵育湿盒保湿,防止液体蒸发
通用注意事项:
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
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实验操作流程:
试剂平衡:全套试剂室温平衡 22min,20 倍浓缩洗涤液稀释,血管内皮上清备用。
标准品稀释:E-Selectin 冻干标准品复溶梯度稀释 6 浓度,空白调零孔。
加样孵育:50μL 标准品 / 样本 + 50μL HRP 酶抗体,封膜 37℃避光孵育 58min。
洗板操作:洗涤液浸泡 30s,拍干,洗板 5 次。
底物显色:底物 A、B 各 50μL,避光孵育 13min。
终止读数:终止液混匀,8min 内检测 OD450。
数据计算:曲线定量 E 选择素,评价内皮炎症黏附分子表达。
关键字: 大鼠E选择素;E-Selectin/CD62E;ELISA试剂盒;
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