本试剂盒运用双抗体夹心ELISA原理,将大鼠sE-selectin特异性捕获抗体包被于酶标板,待测样本中的可溶性E选择素抗原与固相抗体特异性结合,洗涤后加入HRP标记检测抗体,形成稳定的免疫夹心结构,酶促显色终止后测定吸光度,吸光度数值随样本sE-selectin含量升高而增大,结合标准曲线完成定量检测。
基本参数:

产品名称:大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒
英文名称:sE-selectin ELISA Kit
货号:Y-E1486
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度小于1.2 pg/mL
检测范围:5 pg/mL - 160 pg/mL
反应时间:全程130分钟(样本孵育70min、酶标孵育30min、显色30min)
保存条件:试剂盒整体2-8℃保存,标准品、浓缩酶标液单独避光存放
有效期:12个月(2-8℃密封保存)
显色系统:HRP催化TMB底物显色,蓝色产物遇酸变黄稳定显色
检测波长:450nm
标准曲线绘制:8个梯度标准浓度点拟合曲线,R²≥0.992,剔除异常数值点
特异性:特异性识别大鼠sE-selectin,与sP-selectin、sL-selectin无交叉反应,特异性>95%
重复性:板内CV<8%,板间CV<10%
注意事项:血清、血浆样本均可检测,血浆需采用EDTA抗凝;避免高温、强光环境操作;洗板需彻底,避免非特异性吸附造成假阳性。
关键注意事项:

本试剂盒仅科研体外检测,严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射,TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用,杜绝交叉污染;所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃,温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分,残液会造成非特异性结合,背景偏高。
终止后需快速读数,放置过久吸光度会漂移,结果失真。
终止液含稀硫酸,避免接触皮肤、眼睛,若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2~8℃冷链,严禁高温暴晒。
实验步骤如下:

试剂盒室温静置 30min,稀释洗涤浓缩缓冲液待用。
划分微孔用途,空白孔无样本添加,梯度标准品、对照、待测样本稀释后上样并添加酶液。
封板膜封口,37℃恒温孵育 60min。
洗板 5 次,每次浸泡 30s,弃净液体拍干板孔。
显色底物避光显色 15min。
加入终止液终止酶促显色。
酶标仪 450nm 读数,标准曲线计算 sE-selectin 浓度。
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