大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒

双抗体夹心酶联免疫法，微孔板包被抗大鼠 P-Selectin 捕获抗体，样本中可溶性 P 选择素结合固相抗体，洗涤后添加 HRP 标记抗 P-Selectin 检测抗体形成夹心结构，TMB 显色终止后测吸光度，利用标准曲线定量样本中 P 选择素表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤3.0pg/mL

检测范围：8pg/mL - 2500pg/mL

反应时间：总反应时长150分钟（样本温育60分钟+二抗温育30分钟+显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光冷藏，浓缩洗涤液低温避光保存，避免结晶析出

有效期：未开封试剂盒12个月

显色系统：改良型TMB显色体系，显色均匀、稳定性高

检测波长：450nm

标准曲线绘制：标准品梯度稀释，检测OD值后采用四参数回归拟合标准曲线，定量检测样本浓度

特异性：特异性识别大鼠P选择素，与E选择素、L选择素无交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：血浆样本需采用抗凝处理，避免凝血激活导致选择素释放异常；洗板需充分，避免非特异性结合造成背景偏高。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温放置 22min，浓缩洗涤液 1:20 稀释，酶标板拆分后多余孔密封冷藏。

标准品配制：CD62P 标准品溶解后倍比稀释，制备完整浓度梯度，双复孔设置消除误差。

样本上样：标准孔加 50μL 标准液，血浆样本 50μL 加入检测孔，空白孔补稀释液。

酶标抗体孵育：每孔添加 50μL HRP 标记 CD62P 抗体，密封，37℃避光孵育 58min。

洗板操作：弃液加洗涤液浸泡 30s，拍干，重复洗板 5 次。

底物显色：底物 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 14min。

终止读数：加入终止液摇匀，9min 内 450nm 测 OD 值，标准曲线计算 P 选择素含量。