大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒

竞争法酶联免疫吸附检测，酶标板包被 NT-proBNP 抗原，样本中心衰标志物 NT-proBNP 与固相抗原竞争结合酶标抗体，洗板显色后吸光度与靶标浓度负相关，依靠标准曲线完成心衰标志物定量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.05ng/mL，可精准检测大鼠微量NT-proBNP含量

检测范围：0.1ng/mL - 60ng/mL，适配大鼠心力衰竭、心肌损伤模型样本检测

反应时间：总反应时长130分钟，样本孵育70分钟，酶孵育30分钟，显色15分钟，终止5分钟

保存条件：2 - 8℃避光冷藏保存，冻干标准品-20℃分装保存，复溶后冷藏

有效期：原装未拆封有效期6个月，复溶标准品7天内用完

显色系统：高灵敏TMB显色体系，适配心肌标志物微量检测

检测波长：450nm检测，570nm辅助校正背景

标准曲线绘制：7点梯度标准浓度，四参数拟合，R²≥0.996

特异性：特异性识别大鼠NT-proBNP，与BNP、CNP等钠尿肽无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，重复性优异

注意事项：血清、血浆样本需新鲜采集、低温离心；避免样本溶血、脂血；孵育全程恒温37℃，保证抗原抗体结合效率；严格把控实验各步骤时长
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂室温放置 30min，洗涤液 1:20 稀释，大鼠血浆样本冰上缓慢融化。

标准品稀释：NT-proBNP 标准品溶解梯度稀释 6 梯度，空白孔仅加稀释液。

加样孵育：每孔 50μL 标准品 / 样本，酶结合物 50μL，37℃避光孵育 66min。

洗板操作：洗涤液浸泡 36s，彻底拍干，洗板 6 次。

底物显色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 19min。

终止读数：终止液混匀，10min 内 450nm 读数。

数据计算：标准曲线定量 NT-proBNP，评估心肌损伤心衰标志物水平。