山羊P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，以特异性山羊P选择素单克隆抗体包被微孔板，样本中的山羊P选择素可与固相抗体特异性结合，再加入酶标记的检测抗体形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经底物显色、终止反应后，吸光度值与样本中山羊P选择素含量呈正相关，结合标准曲线可精准定量样本指标含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.05ng/mL，可精准检测山羊血清、组织匀浆中微量P选择素含量

检测范围：0.1ng/mL - 20ng/mL，覆盖山羊生理、病理状态下P选择素表达浓度区间

反应时间：标准实验时长100分钟，分阶段孵育，保障抗原抗体特异性结合

保存条件：2-8℃避光保存，浓缩洗涤液低温易结晶，使用前温水轻柔溶解即可，无需高温加热

有效期：未开封有效期12个月，定期储存无失效、活性衰减问题

特异性：特异性识别山羊P选择素，与山羊E选择素、L选择素及其他黏附分子无交叉结合反应

重复性：板内变异系数≤4%，板间变异系数≤6%，检测精度高、稳定性好

注意事项：组织样本需充分匀浆、离心取上清，避免杂质干扰；所有试剂需混匀后使用，避免浓度不均；实验过程避免强光直射酶标板，防止显色底物降解。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

所有试剂室温放置 35min，配制洗涤液与样本稀释缓冲液，酶标板做好分组标记：空白孔、标准品梯度孔、山羊血浆待测样本孔。

空白孔添加纯稀释液，其余孔分别加入不同浓度 P 选择素标准品、离心预处理后的山羊血浆稀释样本，加样时枪头避免触碰孔壁固相载体。

一步法一次性加入辣根过氧化物酶标记抗体工作液，封板密封后轻柔摇晃酶标板使体系混匀。

37℃水浴恒温孵育 70min，保证固相抗体、样本抗原、酶标抗体充分夹心结合。

弃液洗板，每孔注满洗涤液浸泡 40s，反复洗板 6 次，每次在吸水纸上用力拍干微孔板。

每孔加入 TMB 显色混合液，室温避光显色 20min，标准品由高浓度至低浓度蓝色逐级递减。

加入硫酸终止液终止显色，混匀后立即上机测 OD 值，拟合标准曲线换算山羊样本中 P 选择素具体含量。