本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔包被纯化的大鼠MCP-2特异性抗体，加入不同浓度标准品和待测大鼠样本后，样本中的MCP-2抗原被固相抗体特异性捕获，洗涤去除非特异性结合杂质，随后加入酶标记的MCP-2检测抗体，形成特异性免疫复合物，再次洗板后加入显色底物进行酶促反应，显色深浅对应样本中MCP-2含量高低，终止反应后通过酶标仪读数，结合标准曲线实现定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒
英文名称：MCP-2 ELISA Kit
货号：Y-E1500
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测灵敏度≤1.8pg/mL
检测范围：4.0pg/mL - 150pg/mL
反应时间：总反应时长95分钟（温育65分钟、显色30分钟）
保存条件：试剂盒2-8℃保存，洗涤液室温避光存放
有效期：未开封12个月，开封后试剂密封保存，1个月内有效
显色系统：优化型TMB双组分显色体系，显色均匀、误差小
检测波长：450nm/630nm双波长校正
标准曲线绘制：梯度稀释标准品，测定OD值后四参数拟合标准曲线
特异性：专一结合大鼠MCP-2蛋白，与其他趋化家族蛋白无交叉识别
重复性：板内CV≤7%，板间CV≤10%
注意事项：样本避免高温放置，趋化因子易降解；实验耗材需洁净无酶，避免蛋白降解影响结果。
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂盒组分室温平衡 28min，洗涤缓冲液稀释比例 1:24，大鼠腹腔灌洗液样本低速离心取上清。
微孔板分孔添加 100μL 标准品、待测样本、空白液。
酶标记捕获抗体 100μL 加入每孔，覆膜 37℃孵育 80min。
洗涤液浸泡微孔 50s，洗涤 5 次，彻底甩干残留液体。
避光显色液 100μL，室温避光显色 22min。
滴加终止液混匀微孔液体。
450nm 测 OD，标准曲线计算 MCP-2 浓度。
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