大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术，预先在酶标板包被大鼠MCP-3特异性捕获抗体，加入标准品与待测大鼠样本，样本中的MCP-3抗原与固相抗体特异性结合，洗板清除未结合物质后，加入HRP标记的MCP-3检测抗体，形成夹心免疫复合物，经充分洗涤后加入TMB底物显色，酶促反应产生的有色产物浓度与样本MCP-3含量正相关，终止反应后检测吸光度，通过标准曲线计算样本中MCP-3的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒

英文名称：MCP-3 ELISA Kit
货号：Y-E1501

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤1.2pg/mL

检测范围：2.5pg/mL - 100pg/mL

反应时间：总反应时长90分钟（温育60分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光密封保存，严禁冷冻试剂盒组分

有效期：原装试剂盒12个月有效期

显色系统：高灵敏度TMB显色系统，适配低浓度细胞因子检测

检测波长：450nm主波长检测，630nm去除背景干扰

标准曲线绘制：标准品梯度浓度对应吸光度，四参数Logistic拟合，R²≥0.992

特异性：特异性靶向大鼠MCP-3，无同源蛋白交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：血清样本需充分凝固离心，避免纤维蛋白残留；每次实验需同步绘制标准曲线，不可沿用旧曲线。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温静置 32min，洗涤液 1:21 稀释，大鼠组织上清样本冰上操作。

各微孔加入 100μL 对应标准品、组织上清、空白稀释液。

一步混合酶液 100μL / 孔，封板 37℃孵育 55min。

洗涤液浸泡 25s，重复洗涤 3 次，吸干水分。

避光显色 100μL，37℃孵育 13min。

终止液终止显色，轻晃混匀。

酶标仪检测 OD450，定量 MCP-3 含量。
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