大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，利用包被在酶标板上的大鼠GnRHR特异性单克隆抗体捕获样本中的GnRHR抗原，洗板去除未结合的非特异性物质后，加入对应的酶标记特异性检测抗体，与捕获的抗原形成稳定的夹心免疫复合物，经充分洗涤去除游离酶结合物后，加入显色底物发生酶促显色反应，显色深浅与样本中GnRHR含量呈正相关，终止反应后通过检测吸光度值，对照标准曲线即可定量测定大鼠样本中GnRHR的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：大鼠促性腺激素释放激素受体(GnRHR)ELISA试剂盒

英文名称：GnRHR ELISA Kit
货号：Y-E1056

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤0.5ng/mL

检测范围：1.0ng/mL - 40ng/mL

反应时间：总反应时长110分钟（一抗温育60分钟、二抗温育30分钟、显色20分钟）

保存条件：试剂盒组分2-8℃保存，浓缩洗涤液室温避光保存

有效期：原装未开封有效期12个月，开封后试剂1个月内用完

显色系统：TMB单一稳定显色体系，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm单波长检测

标准曲线绘制：梯度标准品浓度对应OD值，四参数拟合生成标准曲线，R²≥0.990

特异性：仅特异性结合大鼠GnRHR，与其他激素受体无交叉识别，特异性＞95%

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：受体蛋白稳定性较差，样本采集后需低温离心分装、-80℃保存，避免反复冻融；温育温度严格控制在37℃，温度偏差会影响结合效率。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒洗涤浓缩液、显色液、标准品 4℃避光静置解冻，大鼠组织匀浆样本冰上融化，避免受体蛋白降解。

酶标板标记孔位，标准品孔添加梯度 GnRHR 重组蛋白 100μL，样本孔加 100μL 大鼠组织上清，空白孔仅加缓冲液 100μL。

一步法混合液（酶标二抗 + GnRHR 捕获抗体）每孔添加 200μL，覆膜封闭，37℃水浴避光孵育 75min。

弃去孔中反应液，洗涤液注满微孔浸泡 45s，反复洗涤 5 次，吸水纸垂直拍干微孔残留洗液。

避光添加单一 TMB 显色液 100μL，37℃避光孵育 20min，控制显色深浅避免过饱和。

加入硫酸终止液 50μL，横向轻摇酶标板 30s 充分中和显色体系。

即刻上机检测 OD450 数值，依据标准曲线换算大鼠样本 GnRHR 蛋白表达量。
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