大鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒

双抗体夹心 ELISA 原理，微孔板包被广谱抗大鼠 IL-1 捕获抗体，样本 IL-1α/IL-1β 总抗原结合固相抗体，洗涤后加入 HRP 标记抗 IL-1 检测抗体构建夹心免疫复合物，底物显色读取 OD 值，标准曲线定量总 IL-1 水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤2pg/mL

检测范围：5pg/mL - 300pg/mL

反应时间：恒温孵育120分钟，二抗反应60分钟，避光显色15分钟

保存条件：2-8℃避光冷藏，所有试剂严禁冷冻、高温暴晒

有效期：原装试剂盒有效期6个月

显色系统：TMB底物显色，硫酸终止液终止显色

检测波长：450nm读取OD值

标准曲线绘制：标准品梯度稀释，检测吸光度，四参数拟合绘制标准曲线，计算样本IL-1浓度

特异性：特异性识别大鼠IL-1，与其他白介素家族因子无明显交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：1. 血清、细胞上清样本避免反复冻融；2. 温育阶段保持恒温，杜绝温度波动；3. 洗板彻底，降低本底值；4. 加样精准，减少实验误差。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温放置 26min，洗涤液 1:20 稀释，底物避光存放。

标准品制备：IL-1 总标准品溶解梯度稀释 7 个梯度，双复孔检测。

加样：标准孔 50μL 标准品，炎症组织匀浆、细胞上清 50μL 加入检测孔。

酶标抗体孵育：每孔 50μL HRP-IL-1 抗体，密封 37℃避光孵育 69min。

洗板：洗涤液浸泡 38s，拍干，洗板 6 次。

显色：底物 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 20min。

终止读数：终止液混匀，10min 内 450nm 测 OD 值，计算总 IL-1 含量。