双抗体夹心 ELISA 法,微孔板包被仅识别 IL-12 P70 异二聚体的捕获抗体,样本完整 IL-12 P70 结合固相抗体,洗板后加入 HRP 标记抗 P70 检测抗体形成夹心复合物,TMB 显色读取吸光度,仅定量功能性 IL-12 异二聚体。
产品参数:
产品名称 | 大鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1538 |
英文名称 | IL-12/P70 ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测灵敏度≤1.8pg/mL
检测范围:3.6pg/mL - 300pg/mL
反应时间:恒温孵育120分钟,酶标二抗反应60分钟,显色20分钟
保存条件:2-8℃避光冷藏保存,底物液单独避光存放
有效期:原装试剂盒有效期6个月
显色系统:TMB底物显色,硫酸终止液终止
检测波长:450nm主波长检测
标准曲线绘制:梯度稀释P70标准品,检测OD值,四参数拟合绘制标准曲线,计算样本浓度
特异性:特异性识别大鼠IL-12完整P70异二聚体,不识别游离P40亚基,无其他细胞因子交叉反应
重复性:板内CV≤8%,板间CV≤10%
注意事项:1. 样本需新鲜制备,低温保存;2. 显色反应严格避光、定时;3. 杜绝试剂交叉污染;4. 实验耗材无热源、无酶污染。
关键注意事项:
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
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实验操作流程:
试剂平衡:试剂盒室温放置 27min,洗涤液 1:20 稀释,全程避光操作。
标准品制备:IL-12 P70 异二聚体冻干标准品梯度稀释 7 个梯度,双复孔。
加样:标准孔 50μL 标准品,免疫细胞培养上清 50μL 加入检测孔。
酶标抗体孵育:每孔 50μL HRP-P70 抗体,密封 37℃避光孵育 71min。
洗板:洗涤液浸泡 39s,拍干,洗板 6 次。
显色:底物 A、B 各 50μL,避光 37℃显色 21min。
终止读数:终止液混匀,10min 内 450nm 测 OD 值,计算完整 IL-12 P70 含量。
关键字: 大鼠白介素12;IL-12/P70;ELISA试剂盒;
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