本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被大鼠ANG-4特异性抗体，加入梯度标准品及待测大鼠样本后，样本中的ANG-4抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，充分孵育后洗涤纯化，加入酶标记ANG-4检测抗体，构建夹心式免疫复合物，经底物酶促显色、终止反应后，利用酶标仪测定吸光度，吸光度数值与样本中ANG-4含量成正比，结合标准曲线完成定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒
英文名称：ANG-4 ELISA Kit
货号：Y-E1082
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测灵敏度≤3pg/mL，精准定量大鼠ANG-4微量表达水平
检测范围：6pg/mL - 900pg/mL，适配大鼠血管发育、修复相关实验检测
反应时间：全流程反应耗时100分钟，反应体系稳定，检测精准度高
保存条件：试剂盒2-8℃避光冷藏，禁止冻融，防潮存放
有效期：未开封试剂盒有效期6个月
特异性：特异性靶向大鼠ANG-4，与ANG家族其他亚型无交叉结合
重复性：板内、板间变异系数均＜8%
注意事项：温育过程禁止晃动酶标板，避免影响抗原抗体结合稳定性。
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
试剂盒室温回温 33min，截取对应酶标条，划分不同实验组并标注孔位。
标准品稀释成 6 组浓度梯度，标准孔加 55μL 标品，大鼠血清样本孔加入 55μL 待测样品，空白孔补稀释液。
每孔加入酶标记抗体 110μL，覆膜密封，37℃避光孵育 72min。
手动洗板 6 次，洗涤液浸泡 36s / 次，彻底去除未结合蛋白。
底物显色液 100μL 加至每孔，避光室温显色 14min。
55μL 终止液终止显色，横向晃动微孔板混匀体系。
酶标仪 450nm 测定吸光值，计算 ANG-4 浓度。
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