大鼠神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，以包被于酶标板的大鼠NT-4特异性抗体为固相捕获抗体。待测样本、标准品中的NT-4抗原可被固相抗体特异性捕获，洗涤去除未结合物质后，加入酶标记的NT-4特异性检测抗体，形成稳定的免疫复合物。后续经显色、终止、吸光度检测步骤，结合标准曲线的浓度梯度关系，精准测定大鼠样本中NT-4的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.2ng/mL，微量NT-4可精准定量。

检测范围：0.5ng/mL - 100ng/mL，适用于大鼠脑、脊髓、外周神经组织及血清样本。

反应时间：全程95分钟，37℃样本温育40分钟、酶结合物温育30分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃冷藏避光，所有试剂组分严禁冷冻结冰。

有效期：未开封有效期12个月，多次取用后1个月内用完。

特异性：特异性识别大鼠NT-4，不与NT-3、BDNF发生交叉免疫反应。

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%，批次检测一致性高。

注意事项：神经组织取材后立即低温保存，防止NT-4蛋白快速降解。
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 34min，配比稀释洗涤液，梯度稀释 NT-4 标准品，标记酶标板各类孔位，待测细胞培养上清提前分装备用。

标准品孔添加 NT-4 梯度标准液 50μL，样本孔加入待测上清样本 50μL，空白孔加基础稀释液 50μL，每孔加入酶结合工作液 100μL，封板膜封闭。

37℃避光孵育 64min，完成抗原抗体夹心结合。

掀开封膜倒掉孔内液体，洗涤液加满浸泡 31s，重复洗板 6 次，吸水纸彻底拍干板条。

每孔依次滴加显色 A 液、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 18min。

逐孔添加终止液 50μL 终止显色，轻微振荡酶标板混匀反应液。

酶标仪 450nm 检测 OD 值，依托标准曲线得出 NT-4 检测浓度。