本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔包被纯化的人桩蛋白特异性抗体，加入梯度标准品和待测细胞、组织样本后，样本中的Pax抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标记Pax检测抗体形成完整免疫夹心复合物，底物显色后终止反应，检测OD值并对照标准曲线，精准定量样本中桩蛋白的表达含量。
基本参数：
产品名称：人桩蛋白(Pax)ELISA试剂盒
英文名称：Pax ELISA Kit
货号：Y-E2943
规格：48T/96T
灵敏度：最低检出 0.17ng/mL
检测范围：0.34ng/mL - 21.76ng/mL
反应时间：总操作 110min，捕获孵育 50min、40min，显色 20min
保存条件：整套试剂 2～8℃，微孔板拆分后必须密封加干燥剂
显色系统：TMB A、B 液混合显色后终止
检测波长：450nm 参比 630nm
标准曲线绘制：四参数 Logistic 方程绘制标准曲线
注意事项：细胞黏附蛋白样本避免胰酶过度消化，过度消化会破坏桩蛋白结构
关键注意事项：
本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。
终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。
终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：
试剂盒室温回温 31min，倍比稀释 Pax 桩蛋白标准品，细胞骨架蛋白裂解上清稀释预处理，对酶标板孔位编号标记。
垂直枪头精准加样，空白孔加稀释缓冲液，标准孔加梯度 Pax 标准液，样本孔加入待测裂解上清样本。
直接向全部反应孔加入酶标记特异性抗体工作液，省略分步孵育洗板，轻晃酶板混匀液体。
封板密封后 37℃恒温避光孵育 65min，酶标板不可堆叠受压。
去除封板倾倒废液，洗板液洗板 4 次，每次浸泡 33s，彻底拍干微孔内洗涤残留。
避光滴加显色 AB 底物液，37℃避光显色 16min，观察梯度色差。
终止液终止反应，酶标仪 450nm 测定 OD 值，换算样本桩蛋白 Pax 表达量。
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