本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测原理，酶标板微孔固相包被有抗人组织蛋白酶D（cath-D）特异性抗体。检测过程中，样本、标准品中的cath-D抗原与固相抗体特异性结合，洗涤除去未结合物质后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。充分洗涤后加入TMB显色底物，在过氧化物酶的催化作用下产生显色反应，反应强度与样本中cath-D含量正相关。终止反应后通过酶标仪测定吸光度，根据标准曲线回归方程，即可计算出样本中人组织蛋白酶D的含量。
基本参数：
产品名称：人组织蛋白酶D(cath-D)ELISA试剂盒
英文名称：cath-D Elisa Kit
货号：Y-E3040
规格：48T/96T
灵敏度：检出下限 0.06ng/mL
检测范围：0.12ng/mL～30ng/mL
反应时间：37℃孵育样本 80min，酶结合物 35min，显色 18min，终止后即刻读板，总耗时 133min
保存条件：试剂盒 2～8℃保存；浓缩标本稀释液室温可存，酶结合物严禁冻存，冻融后直接失效
显色系统：HRP-TMB 显色体系，终止后由蓝色转为黄色
检测波长：450nm 单波长检测
标准曲线绘制：6 个标准品梯度，以浓度 - OD 值做半对数坐标曲线拟合定量
注意事项：样本不可反复冻融超过 2 次；洗板每孔浸泡 30s 再拍干，减少交叉污染；避光操作底物步骤。
关键注意事项：
本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。
终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。
终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：
试剂盒室温平衡 20min，配制洗涤工作液，用样本稀释液倍比稀释 cath-D 标准品。
酶标板各孔分别添加标准品溶液、待测样本、质控品，加样量统一规范，避免交叉污染。
直接加入酶标记结合液，封板密封，37℃避光孵育 70min。
弃液洗板 5 次，每次洗涤后倒置酶标板用力拍干孔内残液。
加入显色底物混合液，避光 37℃显色 16min。
加入终止液终止反应，充分混匀孔内液体。
酶标仪读板，根据标准曲线方程计算 cath-D 样本浓度。
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