人组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固相固定有抗人组织相容性2-K1-K区（H2-K1）特异性抗体。检测过程中，样本与标准品中的H2-K1抗原与固相抗体特异性结合，经洗涤去除未结合杂质后，加入HRP标记的H2-K1配对检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物。随后加入TMB显色底物进行酶促反应，底物显色程度随样本中H2-K1抗原含量升高而加深，终止反应后通过酶标仪检测吸光度，结合标准曲线即可精准测定样本中H2-K1的含量。
基本参数‌：

产品名称：人组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)ELISA试剂盒

英文名称：H2-K1 ELISA Kit
货号：Y-E2591

规格：48T/96T

灵敏度：检测下限 0.2ng/mL

检测范围：0.4ng/mL～18ng/mL

反应时间：室温样本孵育 55min，酶标试剂 40min，底物显色 16min，终止检测，合计 111min

保存条件：试剂盒 2～8℃储存，微孔板条拆开后密封防潮冷藏，洗涤浓缩液室温保存无有效期限制

显色系统：A、B 液混合式 TMB 显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：7 个浓度梯度标准品，线性拟合标准曲线，R² 要求大于 0.99 方可使用

注意事项：避免强光直射试剂盒组分；样本稀释比例严格按照说明书，不可随意更改稀释倍数。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温放置 32min 平衡温度，稀释洗涤液，梯度配制 H2-K1 标准品稀释系列。

酶标板分孔加入标准品、待测细胞上清样本、空白稀释液，精准定容加样。

直接添加酶偶联检测液，封板后 37℃湿盒避光孵育 65min。

弃除孔内废液，洗板 4 次，每次加满洗涤液静置 30s，彻底拍干。

加入 TMB 显色液，遮光条件下显色 17min。

滴加终止液终止酶促反应，震荡混匀微孔板。

酶标仪读取吸光度，依据标准曲线计算 H2-K1 表达量。
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