本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，将抗人pMHC特异性单克隆抗体固定于酶标板孔底，加入待测样本与标准品后，样本中的pMHC复合物与包被抗体特异性免疫结合，经洗涤去除非特异性结合物质，加入辣根过氧化物酶标记的配对抗体形成免疫复合物，充分反应后洗板，加入显色底物孵育显色，通过终止液终止显色反应后，检测各孔吸光度，依据标准品浓度与吸光度拟合的标准曲线，定量分析样本中人pMHC复合物的含量。
基本参数：
产品名称：人肽-主要组织相容性复合体复合物(pMHC)ELISA试剂盒
英文名称：pMHC ELISA Kit
货号：Y-E2835
规格：48T/96T
灵敏度：最低检出限≤0.05ng/mL
检测范围：0.1ng/mL～8ng/mL
反应时间：一抗结合 90min，酶标二抗温育 50min，避光显色 12min
保存条件：整套试剂盒 2～8℃冷藏，严禁冷冻冻裂包被板；浓缩洗涤液室温存放
显色系统：双组分 A、B 液 TMB 显色体系，酸性终止液终止反应
检测波长：读数波长 450nm，校正波长 600nm
标准曲线绘制：采用线性回归法拟合标准曲线，剔除偏差过大标品孔数据
注意事项：操作全程尽量避光，酶结合物开盖后易失活，单次取用快速封盖
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂盒所有组分提前室温放置 25min，取出预包被 pMHC 捕获抗体酶标板，弃净孔中液体，洗板 1 次，彻底拍干微孔。
划分实验孔位：空白对照孔、系列标准品孔、临床待测样本孔；标准品孔添加倍比稀释 pMHC 标准品 60μL，样本孔加入预处理待测上清 60μL，空白孔补稀释液。
直接向全部反应孔加入酶标记二抗工作液 60μL，覆膜封板，37℃湿盒避光孵育 70min。
去除封板膜，倾倒废液，洗板液注满每孔浸泡 40s 后弃液，连续洗板 6 轮，孔口朝下用力拍干水分。
按配比配制显色混合底物液，每孔添加 100μL 底物混合液，室温避光显色 12min。
每孔加注终止反应液 50μL，轻微震荡板体，终止显色。
酶标仪调至 450nm 检测波长，测定每孔 OD 数值，拟合标准曲线换算样本 pMHC 复合物含量。
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