小鼠α甘露糖苷酶(α Manase)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板微孔固相包被有抗小鼠α甘露糖苷酶（α Manase）特异性抗体。检测时，样本与标准品中的α甘露糖苷酶抗原与固相抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫复合物。再次洗涤后加入TMB底物启动酶促显色反应，显色强度随样本中α甘露糖苷酶含量增加而升高，终止反应后测定吸光度值，依据标准曲线可精准计算样本中目标酶的浓度。
基本参数‌：

产品名称：小鼠α甘露糖苷酶(α Manase)ELISA试剂盒

英文名称：α Manase ELISA Kit
货号：Y-E2256

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.11U/L

检测范围：0.25U/L～45U/L

反应时间：样本温育 85min，酶结合物 48min，避光显色 19min，终止 5min 内完成检测，总时长 152min

保存条件：试剂盒 2～8℃避光保存；底物液必须避光，见光易分解失效

显色系统：稳定型单组份 TMB 显色液

检测波长：450nm

标准曲线绘制：线性回归法绘制标准曲线，R²≥0.98 方可用于样本计算

注意事项：酶类样本不可室温放置过久，易发生酶活降解；洗板力度轻柔，防止包被板涂层脱落。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 20min，稀释洗涤液，配制 α 甘露糖苷酶系列标准品。

酶标板精准加样标准品、待测样本、空白对照，加样无挂壁残留。

一步加入酶工作液，封板后 37℃避光孵育 52min。

洗板 5 次，每次加满洗液静置 26s，拍干废液。

显色底物混合液避光显色 12min。

终止液终止反应，混匀板面液体。

酶标仪读数，计算酶活性对应样本含量。
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