大鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双抗体夹心酶联免疫吸附技术，将高特异性的大鼠IL-23抗体固定于酶标板微孔内壁，作为固相捕获抗体，实验中加入的标准品与待测样本中的IL-23抗原可与捕获抗体特异性结合，随后加入酶标记检测抗体与抗原的另一抗原表位结合，形成特异性夹心复合物，洗涤彻底清除未结合的游离抗体、杂质后，加入底物发生显色反应，显色深浅程度与样本中IL-23含量成正比，终止反应后通过酶标仪读数，对照标准曲线即可定量检测大鼠样本中IL-23的浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒

英文名称：IL-23 ELISA Kit
货号：Y-E1301

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤1.2pg/mL

检测范围：3pg/mL - 1000pg/mL

反应时间：总时长3小时，37℃恒温分步孵育

保存条件：2-8℃避光保存，洗涤液室温密封保存即可

有效期：未开封6个月，开封后试剂1个月内用完

显色系统：HRP催化TMB底物显色，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm/620nm双波长校正检测

标准曲线绘制：8个梯度标准品浓度，四参数拟合，剔除异常点后绘制曲线

特异性：特异性靶向大鼠IL-23，与IL-12、其他炎症因子无显著交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：血清、血浆样本需新鲜处理，避免反复冻融；显色液避免接触强光和高温；终止后立即上机检测
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

取出冻干 IL-23 标准品复溶，试剂盒室温放置 30min，酶标板分设标准、待测、空白三组孔；

各标准孔添加 50μL 梯度标准品，待测孔加入大鼠细胞培养上清 50μL，空白孔加稀释缓冲液；

全部微孔加入 100μL HRP 标记抗大鼠 IL-23 抗体，封板膜密封防止蒸发；

37℃恒温避光孵育 70min，实现样本抗原与标记抗体同步结合；

弃孔内液体，洗涤液充分洗涤微孔，每次浸泡 35s，拍干，重复洗涤 5 次；

每孔加入显色底物 A、B 各 50μL，避光静置 37℃反应 18min；

加终止液终止反应，震荡混匀后，450nm 波长测定 OD 值，根据标准曲线计算 IL-23 浓度。
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