本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附原理，预先将大鼠LTB4抗原包被于酶标板微孔内，实验时加入待测样本与LTB4酶标抗体，样本中的游离LTB4抗原与微孔板上包被的固定抗原竞争结合有限的酶标抗体，样本中LTB4含量越高，结合在固相上的酶标抗体就越少，洗涤去除未结合成分后加入底物显色，显色深浅与样本中LTB4浓度呈负相关，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线定量检测大鼠样本中LTB4的含量。
基本参数：
产品名称：大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒
英文名称：LT-B4 ELISA Kit
货号：Y-E1431
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤1.5pg/mL
检测范围：5pg/mL - 1500pg/mL
反应时间：总时长4小时，抗原抗体充分结合
保存条件：2-8℃避光保存，标准品-20℃分装保存
有效期：原装6个月，分装标准品1个月有效
显色系统：适配脂质因子检测的专用TMB显色体系
检测波长：450nm/620nm双波长检测
标准曲线绘制：8梯度浓度，四参数拟合，适配小分子检测
特异性：特异性识别大鼠LTB4，与LTC4、LTE4无明显交叉反应
重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%
注意事项：白三烯类物质易氧化，样本需避光、低温处理；实验全程避光操作
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
LTB4 标准品梯度稀释，试剂盒室温平衡 30min，排布酶标板标准、样本、空白孔；
每孔加入 50μL 标准品或大鼠肺泡灌洗液样本，空白孔填充稀释缓冲液；
加入 100μL 酶标记抗 LTB4 抗体，封板膜密封板面；
37℃恒温避光孵育 60min，一步共孵育抗原抗体结合；
洗板液浸泡微孔 40s，彻底拍干，循环洗涤 5 次；
避光添加显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 15min；
终止液混匀微孔液体，450nm 测吸光度，计算 LTB4 含量。
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