本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板预先包被抗大鼠ALCAM特异性捕获抗体，加入标准品与大鼠待测样本后，样本中的ALCAM抗原被固相抗体特异性捕获，洗板去除非特异性结合杂质，加入HRP标记的ALCAM检测抗体形成夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后，检测吸光度数值，数值大小与样本中ALCAM含量呈正相关，结合标准曲线完成定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒
英文名称：ALCAM ELISA Kit
货号：Y-E1579
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤2.5ng/mL
检测范围：5ng/mL - 1500ng/mL
反应时间：总时长3.8小时
保存条件：2-8℃密封避光保存
有效期：未开封6个月，开封后2个月有效
显色系统：HRP介导TMB底物显色，适配大分子蛋白检测
检测波长：450nm主波长检测
标准曲线绘制：7梯度标准品，四参数拟合标准曲线
特异性：特异性结合大鼠ALCAM黏附因子，与其他黏附分子无交叉反应
重复性：板内CV≤7.5%，板间CV≤9.5%
注意事项：细胞样本需充分裂解离心；避免蛋白样本降解；洗板充分去除非特异性结合物
试剂盒组成：
预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点
辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下：
ALCAM 标准品梯度稀释，试剂盒室温平衡 33min，标记酶标板标准、样本、空白区域；
标准孔、待测孔分别加入 50μL 标准品、大鼠淋巴细胞上清，空白孔补稀释液；
全部微孔加入 100μL HRP 标记抗 ALCAM 抗体，封板膜密封；
37℃恒温孵育 70min，一步同步孵育免疫结合；
洗涤缓冲液浸泡 40s，吸干残留液体，洗涤 6 次；
避光加入显色底物 A、B 各 50μL，37℃避光显色 17min；
终止液终止反应，450nm 测吸光度，换算 ALCAM 浓度。
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