大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的大鼠MMP-13特异性抗体包被于酶标板微孔内，形成固相抗体。实验中加入标准品、待测大鼠样本，样本中的MMP-13抗原可与固相抗体特异性结合，充分洗涤去除未结合物质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体的免疫复合物。再次洗涤洗去游离酶标抗体后，加入底物显色液进行显色反应，在酶的催化下底物产生蓝色产物，加入终止液终止反应后溶液变为黄色。最终通过酶标仪测定450nm波长下各孔吸光度（OD值），OD值与样本中大鼠MMP-ᤌ㷄ᤌ
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 8ng/mL

反应时间：总反应时长120min（包被结合60min、洗涤后酶促反应30min、显色反应30min）

保存条件：试剂盒整体2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂密封避光存放

有效期：未开封原装试剂盒12个月

显色系统：TMB底物显色系统，过氧化氢为氧化剂

检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，采用四参数Logistic拟合绘制标准曲线，计算样本含量

特异性：特异性识别大鼠MMP-13，与大鼠MMP家族其他亚型及同源蛋白无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%

注意事项：实验所有耗材需无酶无菌，样本避免反复冻融；显色时间需严格统一，避光操作；洗涤需充分，避免非特异性吸附影响结果
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，配制洗涤液、样本稀释液、酶结合工作液，取出预包被酶标板条。

设置空白孔、标准品孔、待测样本孔，标准品孔依次加入梯度稀释 MMP-13 标准品 50μL，样本孔加入稀释后待测样本 50μL，空白孔加等量样本稀释液。

每孔即刻加入酶标记结合液 100μL，封板膜密封酶标板，37℃恒温孵育 60min。

揭去封板膜，弃去孔内液体，每孔加满洗涤洗涤液，浸泡 30s 后甩干，重复洗板 5 次，拍干板内残留液体。

每孔依次加入显色液 A 液、显色液 B 液各 50μL，轻柔震荡混匀，避光 37℃显色 15min。

每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，轻微震荡混匀。

酶标仪设置 450nm 波长，15min 内读取各孔 OD 值，依据标准品曲线计算样本 MMP-13 浓度。