本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，将大鼠PI3K特异性抗体包被于酶标板微孔内壁，加入标准品与待测大鼠样本，样本中的PI3K抗原与固相抗体特异性结合，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫复合物，催化底物显色后，依据显色深浅对应的吸光度数值，结合标准曲线定量检测样本中PI3K的浓度。
基本参数：
产品名称：大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒
英文名称：PI3K ELISA Kit
货号：Y-E1314
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤0.06ng/mL
检测范围：0.15ng/mL - 7ng/mL
反应时间：总反应时长135min
保存条件：2-8℃避光密封保存，洗涤液低温防沉淀，试剂禁止冻融
有效期：未开封有效期6个月
显色系统：TMB底物显色，酸性终止液终止反应
检测波长：450nm、630nm双波长校正检测
标准曲线绘制：梯度标准品检测，四参数Logistic拟合标准曲线，精准定量
特异性：特异性识别大鼠PI3K蛋白，与PI3K家族亚型及其他激酶交叉反应率极低
重复性：板内CV＜7%，板间CV＜9%
注意事项：样本避免溶血、脂血，干扰检测结果；温育温度恒定，避免环境温差；读数需在终止后10min内完成
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
取出试剂盒包被板，每孔加入 50μL 梯度标准品或大鼠细胞裂解待测样品，空白孔补稀释液。
每孔加入酶促标记工作液 105μL，密封封板，37℃孵育 62min。
洗板操作：加满洗涤液静置 30s，弃液拍干，反复洗涤 4 轮。
避光加入显色底物 A 50μL、底物 B 50μL，混匀后室温避光显色 17min。
加入终止液 50μL 终止显色反应，震荡微孔板混匀液体。
酶标仪 450nm 检测各孔吸光度，扣除空白孔本底数值。
依托标准曲线计算样本 PI3K 含量，平行复孔取均值作为最终实验结果。
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