本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理,将大鼠FIX特异性抗体包被于酶标板,样本与标准品中的FIX抗原与固相抗体结合,加入酶标记检测抗体构建夹心免疫结构,经洗板、显色、读数后,通过标准曲线定量测定大鼠样本中FIX的含量。
基本参数:

产品名称:大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒
英文名称:FⅨ ELISA Kit
货号:Y-E1306
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测下限≤0.08ng/mL,可精准检出大鼠血浆中FIX微量表达水平。
检测范围:0.1ng/mL - 24ng/mL,覆盖大鼠凝血功能缺陷、血栓模型检测区间。
反应时间:全程实验100分钟,样本孵育35min、酶孵育30min、显色20min、终止15min。
保存条件:2-8℃避光冷藏,酶结合物、标准品单独密封,严禁冷冻失活。
有效期:未开封试剂盒有效期6个月,规范存放性能稳定。
显色系统:优化HRP-TMB显色体系,显色特异性强,背景噪音极低。
检测波长:450nm主波长,630nm参比波长,双波长校正检测误差。
标准曲线绘制:四参数Logistic拟合标准曲线,R²≥0.992,定量精准度高。
特异性:专一结合大鼠凝血因子IX,与其他凝血因子无交叉反应。
重复性:板内CV≤7%,板间CV≤9%,批次重复性优异。
注意事项:血浆样本需规范抗凝,无凝血、无溶血;实验全程避免试剂光照降解。
关键注意事项:

本试剂盒仅科研体外检测,严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射,TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用,杜绝交叉污染;所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃,温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分,残液会造成非特异性结合,背景偏高。
终止后需快速读数,放置过久吸光度会漂移,结果失真。
终止液含稀硫酸,避免接触皮肤、眼睛,若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2~8℃冷链,严禁高温暴晒。
实验步骤如下:

微孔板每孔加入梯度标准品 48μL,枸橼酸钠抗凝血浆待测样本 48μL,设置对照孔。
特异性酶标二抗 101μL 加入各孔,封板避光,37℃孵育 66min。
弃净孔内液体,洗涤液浸泡 29s,拍干,循环洗板 5 次。
避光加入显色底物 A、B 各 50μL,混匀后暗处显色 13min。
加入终止液 50μL 终止酶促反应,横向摇晃微孔板混匀体系。
酶标仪 450nm 读取原始 OD 数据,避免样本反复冻融。
标准曲线计算 FIX 浓度,判定内源性凝血因子水平。
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