大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶免疫检测原理，酶标板预先包被大鼠MIP-3α/CCL20特异性抗体，能够特异性识别并结合样本中的巨噬细胞炎性蛋白3α抗原。孵育结合充分后洗涤去除游离杂质，加入酶标检测抗体形成免疫夹心复合物，底物显色深浅对应目标蛋白含量。结合标准曲线，可精准定量大鼠样本中MIP-3α/CCL20的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.08pg/mL，可检测微量炎性趋化因子。

检测范围：0.1pg/mL - 18pg/mL，适配大鼠皮肤、肠道炎症组织及血清样本。

反应时间：全流程100分钟，温育70分钟，显色20分钟。

保存条件：2-8℃避光冷藏保存，洗涤液室温存放。

有效期：未开封有效期6个月，开封后30天内使用。

显色系统：TMB-HRP显色体系，显色均匀稳定。

检测波长：450nm主波长检测。

标准曲线绘制：四参数拟合，R²≥0.992。

特异性：特异性识别大鼠CCL20，与其他趋化因子无交叉反应。

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%。

注意事项：黏膜组织样本需充分清洗匀浆；实验避光温育，避免试剂失效。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂室温静置 35min，配制洗涤液，梯度稀释 MIP-3α/CCL20 标准品，取出酶标板条。

标准孔加梯度浓度标准品 50μL，待测样本孔上样 50μL 预处理上清，空白孔添加稀释缓冲液。

全孔加入酶结合工作液 100μL，覆膜密封，37℃孵育 72min。

洗板 5 次，浸泡 35s 每轮，甩干液体拍干微孔残留液体。

避光添加显色 A、B 底物各 50μL，37℃避光显色 20min。

加入终止液 50μL 混匀终止酶促反应。

450nm 读取吸光度，曲线定量 MIP-3α/CCL20 含量。