大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒

本试剂盒基于竞争法ELISA检测原理，酶标板微孔预先包被大鼠TBA抗原。检测过程中，样本中的大鼠总胆汁酸抗原与固相包被抗原竞争结合有限的HRP标记TBA特异性抗体，样本中TBA含量越高，结合在固相上的酶标抗体就越少。经充分洗涤后加入TMB底物显色，酶促反应产生的有色产物吸光度与样本中TBA浓度呈负相关，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线即可精准定量大鼠样本中总胆汁酸的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1μmol/L

检测范围：0.2μmol/L - 100μmol/L

反应时间：总反应120分钟（37℃孵育60min、酶反应30min、显色30min）

保存条件：2-8℃密封避光保存，洗涤液常温存放

有效期：12个月

检测波长：450nm/630nm双波长检测

标准曲线绘制：六梯度标准品拟合曲线，R²≥0.992

注意事项：空腹采集血清样本，避免饮食干扰胆汁酸数值，样本无脂血、黄疸污染
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂室温放置 28min，稀释洗涤缓冲液，待测血清样本避免溶血，按需拆封酶标板，多余板条密封冷藏。

2. 标准品孔加入梯度 TBA 标准品 50μL，样本孔上样 50μL 待测血清，空白对照孔补稀释液。

3. 每孔加入酶结合工作液 100μL，封板封口，37℃温育 55min。

4. 洗板 5 次，洗涤液浸泡 40s / 次，甩干废液并拍干微孔。

5. 避光加入显色底物 A、B 各 50μL，轻柔震荡，37℃避光显色 16min。

6. 滴加终止液 50μL 混匀终止反应。

7. 450nm 检测吸光度，计算样本总胆汁酸 TBA 浓度。