马主要组织相容性复合体(MHC/ELA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板微孔包被马主要组织相容性复合体（MHC/ELA）特异性捕获抗体，待测样本中的MHC/ELA抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质后，加入酶标记检测抗体构建免疫夹心结构，经底物显色、终止反应后，显色深浅与抗原含量成正比，通过标准曲线可定量检测马MHC/ELA的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出浓度0.09ng/mL，精准检测马血清、淋巴细胞中MHC微量蛋白。

检测范围：0.18ng/mL - 95ng/mL，覆盖马免疫、遗传育种实验检测浓度区间。

反应时间：总实验时长95分钟，免疫蛋白孵育45分钟，显色20分钟。

保存条件：2-8℃避光冷藏保存，免疫蛋白试剂稳定性优异。

有效期：严格储存条件下有效期12个月。

特异性：专一识别马MHC/ELA复合体，与其他哺乳动物MHC蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，动物免疫实验重复性达标。

注意事项：淋巴细胞样本需无菌分离，杂菌污染会影响免疫蛋白检测精度。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂盒室温回温 30min，配比稀释洗涤液，拆分微孔板条并编号标记。

MHC 标准品梯度稀释，马外周血淋巴细胞上清稀释，每孔加 56μL 待测液或标准液。

直接加入酶标检测抗体 104μL，空白孔添加稀释缓冲液，封板避光孵育。

37℃恒温孵育 65min，完成一步夹心免疫结合。

自动洗板 5 轮，每轮浸泡 35s，去除未结合游离蛋白。

避光滴加显色 A、B 液各 50μL，轻微震荡后 37℃显色 15min。

终止液终止反应，12min 内 450nm 检测吸光度，计算马 MHC 分子含量。