人T细胞受体(TCR)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板固相载体包被人T细胞受体（TCR）特异性捕获抗体，样本与标准品中的TCR抗原可特异性结合固相抗体，洗板去除非特异性结合成分后，加入HRP标记的TCR检测抗体，构建固相免疫复合物，经充分洗涤后加入显色底物发生酶促显色反应，终止反应后通过酶标仪读取吸光度，依据吸光度与TCR浓度的正相关关系，定量测定样本中TCR的含量。
基本参数‌：

产品名称：人T细胞受体(TCR)ELISA试剂盒

英文名称：TCR ELISA Kit
货号：Y-E2839

规格：48T/96T

1.灵敏度：最低可测≤6pg/mL

2.检测范围：12.5pg/mL - 400pg/mL

3.反应时间：捕获孵育 70min，二抗结合 42min，显色 14min

4.显色系统：HRP-TMB 双组分显色

5.检测波长：450nm

6.特异性：识别人 TCRαβ 复合体，不结合免疫球蛋白分子

7.重复性：板内 CV＜6.2%，板间 CV＜8.8%

8.注意事项：样本稀释倍数建议梯度预实验确定，避免浓度超出标准曲线区间
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

1. 试剂室温放置 30min，稀释洗涤液，标准品溶解稀释制备梯度浓度，待测样本室温融化后混匀。

2. 设置空白、标准、样本三类孔，标准孔加标准品 50μL，样本孔加待测样本 50μL，空白孔不加试剂。

3. 除空白孔外每孔添加酶标记抗体工作液 100μL，封板膜密封酶标板，水平摇晃混匀。

4. 37℃恒温孵育 60min，孵育期间酶标板单层放置。

5. 去除封板膜，倒出孔内液体，洗涤液浸泡 30s 甩干，洗板 5 次，拍净孔内残留液体。

6. 避光添加显色 A、B 液各 50μL，轻微震荡，37℃避光显色 15min。

7. 终止液每孔 50μL 终止反应，酶标仪检测吸光度，通过标准曲线计算样本 TCR 表达量。
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