人α乳清蛋白(α-La)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测样本中人α乳清蛋白含量，预先将特异性抗人α-La抗体包被于酶标板微孔内，加入待测样本、标准品后，样本中的α-La抗原会与包被抗体特异性结合，洗去未结合杂质后加入酶标记二抗，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，经底物显色、终止液终止反应后，通过酶标仪测定各孔吸光度值，吸光度数值与样本中α-La含量呈正相关，依据标准曲线即可精准计算样本中目标蛋白浓度。
产品参数：

‌1.灵敏度：最低检出量≤0.1ng/mL

2.检测范围：0.312~20ng/mL

3.反应时间：样本孵育 60min，酶结合物孵育 30min，底物避光显色 15min，终止后即刻读数

4.显色系统：TMB 单组分显色液

5.检测波长：450nm（参比 630nm）

6.特异性：仅与人 α-La 特异性结合，与同源乳清类蛋白无明显交叉反应

7.重复性：板内 CV＜6%，板间 CV＜8%

8.注意事项：样本避免反复冻融；底物避光保存，显色液变色严禁使用
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

提前将试剂盒所有组分、待测样本、标准品从冷藏环境取出，室温平衡 30min；配制洗涤液、梯度稀释标准品，标记酶标板对应孔位（标准品孔、样本孔、空白孔）。

向酶标板各孔依次加入稀释完成的标准品、待测样本，空白孔加入对应稀释缓冲液，每孔定量加样，全程避免孔内产生气泡。

直接向所有加样完毕的反应孔中加入酶结合工作液，封板膜密封酶标板，室温避光孵育 60min，完成抗原抗体一步结合反应。

揭去封板膜，弃去板内全部液体，每孔加满洗涤洗涤液，静置 30s 后甩干，重复洗板操作 5 次，最后一次拍干孔内残留液体。

每孔精准加入显色底物 A 液与 B 液，轻柔震荡酶标板混匀，避光室温显色 15min，观察孔内溶液渐变蓝色。

每孔加入终止液终止酶促显色反应，溶液由蓝色转为黄色，轻晃酶标板保证孔内液体混匀无局部色差。

酶标仪设置对应检测波长，读取各孔 OD 吸光度值，根据标准品浓度与 OD 值绘制标准曲线，代入样本 OD 值计算样本中 α-La 实际浓度。