人β甘露糖苷酶(βManase)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测人样本中β甘露糖苷酶含量，酶标板微孔固相化βManase特异性捕获抗体，加入样本与标准品后，目标酶蛋白抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗涤去除未结合的杂蛋白与杂质，加入酶标记检测抗体形成夹心复合物，催化底物发生显色反应，终止后检测吸光度，结合标准曲线定量测定βManase浓度。
产品参数：

‌1.灵敏度：检出下限 0.08ng/mL

2.检测范围：0.25~16ng/mL

3.反应时间：样本室温孵育 75min，二抗 45min，显色 17min

4.显色系统：单组分 TMB 显色

5.检测波长：450nm，校正 630nm

6.特异性：专一识别人 β 甘露糖苷酶，α 型糖苷酶无交叉反应

7.重复性：板内 CV≤6.3%，板间 CV≤8.1%

8.注意事项：样本避免高温灭活，会造成靶蛋白降解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温回温 33min，溶解标准品并倍比稀释，待测组织匀浆上清样本预处理，划分酶标板反应孔类型并编号。

向对应微孔加入标准品、待测上清样本，空白孔加入稀释缓冲液，加样枪垂直滴加无挂壁残留。

直接加入酶结合抗体工作液，封板后 37℃避光孵育 72min，一步完成免疫夹心结合。

倒掉孔内反应液，洗板液浸泡微孔 35s 甩干，重复洗板 5 次，拍干板条多余洗液。

避光加入显色底物液，混匀后暗处显色 18min。

加入终止液终止显色反应，充分混匀每孔液体。

酶标仪测定 450nmOD 值，绘制标准曲线计算 βManase 浓度。