本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理,酶标板微孔包被人单纯疱疹病毒抗原2特异性抗体,待测样本中的HSV-Ag2抗原与包被抗体特异性结合,洗板后加入酶标记检测抗体形成免疫夹心复合物,酶促底物产生有色产物,终止反应后检测吸光度,对照标准曲线定量测定样本中HSV-Ag2抗原含量。
基本参数:

产品名称:人单纯疱疹病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISA试剂盒
英文名称:HSV-Ag2 Elisa Kit
货号:Y-E754
规格:48T/96T
灵敏度:病毒抗原最低检出 7.5pg/mL
检测范围:20pg/mL - 800pg/mL
反应时间:捕获孵育 92min,酶结合 52min,显色 23min,总 167min
显色系统:HRP 介导 TMB 显色,稀硫酸终止
检测波长:450nm
特异性:直接靶向 HSVⅡ 型病毒抗原,不检测宿主同源蛋白
重复性:板内 CV<8.2%,板间 CV<9.8%
注意事项:临床拭子样本充分洗脱后再上样,显色步骤严格避光,不可中途开盖
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

试剂盒室温复温 36min,配置洗涤工作液,规划酶标板孔位,区分标准孔、样本孔、空白孔。
HSV-Ag2 梯度标准品每孔加 50μL,病灶组织 / 细胞裂解样本稀释后上样 50μL,空白孔加入稀释液。
每孔加入 HRP 标记抗体工作液 100μL,封板密封,震荡混匀 21s。
37℃避光孵育 66min,抗原与包被抗体、酶标抗体夹心结合。
洗板 6 轮,每轮洗涤液加满微孔浸泡 37s,甩干废液后彻底拍干板条。
避光加入显色底物 A、B 各 50μL,混匀后 37℃避光显色 20min。
终止液终止反应,14min 内 450nm 检测 OD 值,标准曲线计算 HSV-Ag2 抗原含量。
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