人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测人样本中BACE1蛋白含量，酶标板微孔固相化抗人BACE1特异性抗体，加入待测样本与梯度标准品后，样本中的BACE1抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗涤清除游离杂质，加入酶标记配对检测抗体形成稳定复合物，催化底物显色，显色深浅与BACE1含量正相关，通过标准曲线完成定量检测。
产品参数：

‌1.灵敏度：最低检出 3pg/mL

2.检测范围：9.375~600pg/mL

3.反应时间：捕获抗体孵育 110min，检测抗体 65min，显色 28min

4.显色系统：高灵敏双抗体夹心 TMB 显色

5.检测波长：450nm，参比 630nm

6.特异性：特异性结合 BACE1，与 BACE2 无交叉识别

7.重复性：板内 CV≤6.2%，板间 CV≤8.2%

8.注意事项：脑组织样本全程低温操作，分装冻存避免反复冻融
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温回温 42min，标准品用稀释液配制 6 档梯度浓度，脑组织匀浆 / 脑脊液样本预处理去除沉淀，标记酶标板孔位。

向微孔加入标准工作液、待测生物样本，空白孔加入等量样本稀释液，缓慢垂直加样保护固相包被。

直接加入酶标特异性抗体工作液，封板膜封闭，37℃避光孵育 85min，一步法夹心 ELISA 反应。

弃去孔内液体，洗板液注满微孔浸泡 50s 后甩干，重复洗板 7 次，吸水纸用力拍干残留洗液。

避光添加显色底物 A、B 液，混匀后暗处显色 23min。

加入终止液终止酶促显色，充分震荡酶标板使各孔混匀。

450nm 波长酶标仪检测吸光度，根据标准曲线换算 BACE1 浓度。