人淀粉样前体蛋白(βAPP)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA技术原理，微孔板固相包被人淀粉样前体蛋白特异性捕获抗体，待测样本中的βAPP抗原与固相抗体特异性免疫结合，孵育洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成完整的夹心免疫复合物，再次洗涤后加入显色底物启动酶促反应，显色深浅与样本中βAPP含量成正比，通过酶标仪读数与标准曲线换算实现精准定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人淀粉样前体蛋白(βAPP)ELISA试剂盒

英文名称：βAPP ELISA Kit
货号：Y-E3532

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.06ng/mL

检测范围：0.12ng/mL - 7.68ng/mL

反应时间：总时长 165min（样本 90min，二抗 55min，避光显色 20min）

显色系统：高灵敏捕获法 TMB 显色体系

检测波长：450nm+620nm

特异性：识别全长 βAPP 前体蛋白，不单独结合 Aβ 降解片段

重复性：板内 CV＜4.9%，板间 CV＜6.2%

注意事项：脑脊液样本低温转运分装，反复冻融会造成 APP 蛋白断裂降解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

整套试剂室温平衡 36min，稀释洗涤工作液，逐级稀释 βAPP 标准品，酶标板划分并编号各类反应孔。

对应孔位加入梯度标准液、稀释待测样本、空白稀释液，加入一步法酶结合液，密封封板。

37℃避光孵育 76min，完成抗原与双抗体一步结合。

去除封板倾倒废液，洗涤液浸泡 35s，洗板 5 次，彻底拍干所有残留液体。

加入显色 A、B 液混匀，37℃避光显色 24min。

加入终止液终止显色，摇晃酶标板混匀整体体系。

15min 以内 450nm 波长检测 OD 值，计算样本 βAPP 浓度。
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