人白细胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA技术原理，固相酶标板包被有靶向人LCA/CD45的特异性捕获抗体，实验过程中，样本及梯度标准品中的CD45抗原与固相抗体特异性结合，充分洗板去除游离杂蛋白后，加入HRP标记的CD45检测抗体，构建完整的免疫夹心复合物；经底物催化显色、终止反应后检测吸光度，颜色深浅对应样本中LCA/CD45的含量高低，通过标准曲线回归分析即可完成定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低可测 0.42 ng/mL

检测范围：0.85 ng/mL ~ 54 ng/mL

反应时间：样本上清孵育 115min，二抗 65min，显色 17min

显色系统：即用型稳定 TMB 显色液

检测波长：450nm+620nm

特异性：广谱识别人 CD45 所有亚型，与白细胞表面其他黏附分子无交叉

重复性：板内 CV＜7.9%，板间 CV＜10.5%

注意事项：组织匀浆样本需充分离心去除残渣；孔板密封孵育防止液体蒸发
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

酶标板条室温复温 20min，标准品逐级稀释，细胞裂解样本按比例稀释处理。

每孔加入标准品或待测样本 100μL，空白孔加稀释液，同步加入酶标记二抗 60μL 密封。

37℃湿盒孵育 90min。

洗板 6 次，每次浸泡 26s，充分去除游离蛋白杂质。

加入显色液 100μL，遮光 37℃显色 11min。

终止液 50μL 终止显色反应。

酶标仪 450nm 读数，依据标准曲线定量 CD45 抗原表达量。