人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的人Apaf-1特异性抗体包被于微孔板孔底，形成固相抗体，向孔内加入待测样本、标准品，样本中的Apaf-1抗原会与固相抗体特异性结合，充分洗涤去除未结合杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物，再次洗涤后加入底物显色液进行显色反应，在酸性终止液作用下终止反应，最终通过酶标仪测定对应波长下的吸光度值，吸光度值与样本中Apaf-1的含量呈正相关，结合标准曲线即ỹ緼ỹ
基本参数‌：

产品名称：人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒

英文名称：Apaf-1   Elisa Kit
货号：Y-E292

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出量≤0.05ng/mL

检测范围：0.15ng/mL～9.6ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，酶结合物孵育 30min，底物显色 15min，终止后立即读数

显色系统：TMB 单组分显色液

检测波长：450nm（参比 630nm）

特异性：仅与人 Apaf-1 特异性结合，与同源凋亡蛋白无交叉反应

重复性：板内 CV＜6%，板间 CV＜10%

注意事项：底物避光保存，显色避免强光照射；标本避免反复冻融
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂提前室温平衡 30min，浓缩洗涤液按说明书比例用蒸馏水稀释备用，取出所需酶标板条，剩余板条密封冷藏保存。

设定空白孔、标准品孔、待测样品孔，每孔直接加入对应稀释完成的标准品、待测样本各 50μL，空白孔不加液体。

所有孔内即刻加入一步法酶结合工作液 100μL，轻轻晃动酶标板混匀，覆膜封板。

37℃恒温孵育 60min，期间避免酶标板受热不均、液体蒸发。

揭去封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满稀释后洗涤液，静置 30s 后拍干，重复洗板 5 次，彻底拍净孔内残留液体。

每孔依次加入显色剂 A 液、显色剂 B 液各 50μL，避光轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min。

每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，10min 内使用酶标仪在 450nm 波长处读取各孔 OD 值，对照标准曲线计算样本 Apaf-1 浓度。
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