人对氧磷酶(PON)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被人PON特异性捕获抗体，加入待测血清、组织样本及标准品，样本中的PON抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合组分后，加入辣根过氧化物酶标记的PON检测抗体，形成稳定的夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后，检测体系吸光度，结合标准曲线可精准定量样本中人PON的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人对氧磷酶(PON)ELISA试剂盒

英文名称：PON Elisa Kit
货号：Y-E3005

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.07μg/mL

检测范围：0.22μg/mL～14μg/mL

反应时间：37℃样本 70min，酶标二抗 38min，显色 15min

显色系统：预混即用型 TMB 显色液

检测波长：450nm+630nm 双波长读数

特异性：主要识别 PON1，与 PON2、PON3 交叉结合＜5%

重复性：批内 CV≤5.6%，批间 CV≤9.6%

注意事项：高脂血清样本静置分层后取上层清液检测，降低脂血干扰
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温回温 30min，稀释浓缩洗涤液制成工作液，拆分酶标板，多余板条密封低温避光。

梯度标准品、待测样本分别加至对应孔位，每孔 50μL，空白孔空置。

直接加入一步法酶抗体工作液 100μL，混匀覆膜封板。

37℃恒温孵育 65min，保证特异性结合充分进行。

撕膜倒掉废液，洗涤液注满微孔静置 30s 拍干，洗板 5 轮。

避光添加显色 A、B 液各 50μL，摇匀后 37℃显色 15min。

终止液终止显色，10min 内 450nm 测吸光度，定量 PON 表达水平。
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