人多功能蛋白聚糖(VS)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固定纯化的人VS特异性抗体，加入待测组织、血清样本后，样本中的VS抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合组分，加入酶标记二抗构建免疫复合物，底物显色后产生梯度有色产物，产物吸光度与样本中VS浓度呈正相关，依托标准曲线可精准定量检测人VS含量。
基本参数‌：

产品名称：人多功能蛋白聚糖(VS)ELISA试剂盒

英文名称：VS ELISA Kit
货号：Y-E2575

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.15ng/mL

检测范围：0.47ng/mL～30.08ng/mL

反应时间：37℃样本 62min，酶复合物 33min，显色 11min

显色系统：双组份 TMB 显色液

检测波长：450nm 搭配 550nm 扣除本底

特异性：结合 VS 核心蛋白，对其他蛋白聚糖交叉反应＜4%

重复性：批内 CV≤6.6%，批间 CV≤10.6%

注意事项：关节滑液样本需低速离心去除细胞碎片后检测
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒全部组分室温复温 34min，稀释洗涤液，拆分酶标板，未用板条密封避光存放。

标准梯度孔、样品孔分别加入对应样品 50μL，空白孔无加样。

各孔加入酶标记一步反应液 100μL，震荡混匀，封板密封。

37℃孵育 62min，静置完成抗原抗体结合。

倒净废液，洗涤液浸泡 30s 拍干，连续洗板 4 次。

避光加入显色 A、B 液各 50μL，37℃显色 16min。

终止液终止显色，酶标仪 450nm 测值，对照标准曲线计算 VS 浓度。
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