人补体片断3b(C3b)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理检测样本中人补体片断3b(C3b)含量。酶标板预先包被C3b特异性捕获抗体，加入标准品与待测样本孵育反应，样本中的C3b抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离反应物后，加入生物素化检测抗体与酶标记链霉亲和素，形成完整免疫夹心结构，吸光度值与C3b浓度成正比，通过标准曲线可实现精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：0.085μg/mL

检测范围：0.17μg/mL～10.9μg/mL

反应时间：夹心法孵育 69min，二抗孵育 30min，显色 13min

显色系统：HRP-TMB 显色 + 酸性终止液配套套装

检测波长：450nm 主波长读数

特异性：精准识别 C3b 活化片段，C3a、iC3b 交叉反应率＜5%

重复性：板内 CV≤5.3%，板间 CV≤8.3%

注意事项：所有耗材无热源无蛋白酶污染，防止 C3b 体外降解。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

微孔板同步加入系列标准品、待测样本上清、酶标记一抗，封口 37℃孵育 63min，洗板 4 次。

洗涤液注满微孔静置 35s 后倒净废液，重复洗涤步骤，倒扣拍干微孔。

加入显色底物避光显色 18min。

滴加终止液终止酶促显色，混匀酶标板内液体。

酶标仪 450nm 读取全部孔位 OD 吸光值。

根据标准品数据绘制标准曲线。

带入样本 OD 值计算 C3b 片段浓度，剔除异常数据后归档结果。