人补体片断4b(C4b)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法原理，预先将特异性人C4b抗体包被于微孔板固相载体上，加入待测样本后，样本中的人补体片断4b可与固相抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心复合物，再次洗涤去除游离组分，加入底物进行显色反应，酶催化底物产生有色产物，显色深浅与样本中C4b含量呈正相关，通过酶标仪测定吸光度，结合标准曲线即可精准定量样本中人补体片断4b的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低可检测值 0.05ng/mL

检测范围：0.15ng/mL–9.6ng/mL

反应时间：总时长 110min（样本孵育 60min，二抗孵育 30min，显色 15min，终止 5min）

显色系统：TMB 单组份显色液，过氧化氢底物体系

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

特异性：仅与人 C4b 发生特异性结合，与 C4a、C3b、C5b 无交叉反应

重复性：板内变异系数 CV＜6.5%，板间变异系数 CV＜8.0%

注意事项：试剂盒开封后 1 个月内用完；样本避免反复冻融，离心去除溶血杂质；终止液为稀硫酸，禁止接触皮肤黏膜。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，配置 C4b 标准品梯度稀释液，取出包被酶标板，标记样本孔、标准品孔、空白孔。

每孔依次加入对应浓度 C4b 标准品、待测人血清样本、稀释缓冲液（空白孔），每孔加样量严格按照说明书定容。

一步法直接加入预先混合好的酶结合物工作液，封板膜密封酶标板，37℃恒温避光孵育 60min。

揭去封板膜，弃去孔内全部液体，洗板液注满每孔静置 30s 后拍干，重复洗板 5 次，彻底去除未结合杂质。

所有孔内加入显色底物 A、B 混合显色液，室温避光显色 15min，观察标准品孔梯度蓝色显色差异。

即刻向每孔加入终止液终止酶促显色反应，轻晃酶标板混匀液体，溶液由蓝转为黄色。

酶标仪设置 450nm 波长读取各孔 OD 吸光度值，依据标准品曲线计算样本中人 C4b 实际浓度，整理实验数据归档。