人泛素结合酶(E2/UBCE)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测技术，固相微孔板固定人泛素结合酶(E2/UBCE)特异性抗体，待测样本中的E2/UBCE抗原与固相抗体特异性识别结合，再与酶标记检测抗体形成稳定免疫复合物，通过酶催化底物显色反应，依据吸光度与抗原浓度的正相关关系，定量检测样本中人E2/UBCE的含量。
基本参数‌：

产品名称：人泛素结合酶(E2/UBCE)ELISA试剂盒

英文名称：E2/UBCE Elisa Kit
货号：Y-E3067

规格：48T/96T

灵敏度：检测极限 0.08ng/mL

检测范围：0.25ng/mL - 28ng/mL

反应时间：孵育 68min，酶结合物 36min，显色 13min

显色系统：稳定型 TMB 显色液

检测波长：450nm

特异性：针对 E2 保守结构域，与 E1、E3 交叉反应率＜3.2%

重复性：批内 CV≤5.9%，批间 CV≤8.1%

注意事项：冻融样本最多 1 次，反复冻融会造成 E2 蛋白解离降解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂室温回温 29min，稀释浓缩洗涤液，配制 E2 梯度标准品溶液，划分酶标板检测区域并标记复孔。

空白孔加稀释液 50μL，标准与样本孔加对应液体 50μL，同步加入酶结合工作液 100μL，封板。

37℃避光孵育 58min，孵育环境避光隔热。

倒掉孔内废液，洗涤液加满浸泡 36s，拍干，洗板 5 次。

加入显色底物 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 18min。

加入终止液 50μL / 孔，充分混匀终止反应。

酶标仪 450nm 测定吸光度，通过标准曲线计算 E2/UBCE 含量。
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