人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒

人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒：本试剂盒采用酶联免疫吸附双抗体夹心原理，预先将纯化的人封闭抗体特异性包被抗体固定于酶标板孔内，标准品、待测样本中的人封闭抗体可与包被抗体特异性结合，再加入酶标记的检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过充分洗涤去除未结合杂质后，加入底物显色液发生酶促显色反应，显色深浅与样本中人封闭抗体含量呈正相关，最后通过酶标仪测定吸光度，结合标准曲线即可精准计算样本中封闭抗体的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒

英文名称：BA   Elisa Kit
货号：Y-E403

规格：48T/96T

灵敏度：最低可检测浓度 0.5ng/mL

检测范围：1.5ng/mL～48ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，二抗孵育 30min，底物显色 15min，终止后立即读数

显色系统：TMB 单组分显色液，酶促显色

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

特异性：仅与人封闭抗体发生特异性结合，与人体其他同源抗体无交叉反应

重复性：板内变异系数＜8%，板间变异系数＜10%

注意事项：试剂盒需 2～8℃避光保存；显色避光操作；标本避免反复冻融，溶血样本不可使用
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

取出试剂盒室温平衡 30min，设置空白孔、标准品孔、待测样本孔，每孔加入对应稀释好的标准品、待测样本各 50μL，空白孔不加液体。

所有孔内立即加入一步法酶结合工作液 100μL，轻轻震荡酶标板混匀，封板膜密封板条。

将酶标板置于 37℃恒温孵育箱避光孵育 60min。

小心撕去封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，拍干板内残留液体。

每孔依次加入显色底物 A 液、B 液各 50μL，轻柔混匀，37℃避光显色 15min。

每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，轻晃酶标板混匀。

15min 内使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔 OD 值，对照标准曲线计算样本中封闭抗体含量。
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