本试剂盒采用间接酶联免疫吸附法原理,将纯化的人钙调素抗原包被于酶标板固相载体上,封闭非特异性结合位点后,加入待测人血清或样本,样本中存在的抗钙调素特异抗体可与固相上的钙调素抗原发生特异性免疫结合;充分洗涤去除未结合杂质后,加入酶标记二抗与结合的一抗特异性结合,再次洗涤去除游离酶标二抗,加入底物液进行显色反应,显色深浅与样本中抗钙调素特异抗体含量呈正相关,通过酶标仪测定吸光度,结合标准曲线即可定量检测样本中CAM-ab的浓度。
基本参数:

产品名称:人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)ELISA试剂盒
英文名称:CaM-ab Elisa Kit
货号:Y-E398
规格:48T/96T
灵敏度:最低可检测浓度<1.0ng/mL
检测范围:0.5ng/mL~16ng/mL
反应时间:样本孵育 60min;洗板后二抗孵育 30min;底物避光显色 15min;终止后立即读数
保存条件:未拆封试剂盒 2~8℃避光储存;开封后板条密封 2~8℃可存放 1 个月;浓缩洗涤液 2~8℃防冻保存
显色系统:TMB 单组分显色液,HRP 酶促显色
检测波长:主波长 450nm,参比波长 630nm
标准曲线绘制:以标准品浓度为横坐标,对应 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 拟合绘制标准曲线,样本浓度由曲线方程换算得出
注意事项:所有试剂使用前平衡至室温;避免板孔交叉污染;显色超时易出现本底偏高;血清样本需无溶血、无脂血
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

样本稀释配制:血清样本用试剂盒配套样本稀释液按 1:100 比例稀释,充分涡旋混匀,室温静置 5min 备用;空白孔仅加样本稀释液,无需稀释样本。
板条加样铺板:取出预包被 96 孔酶标板,设置空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔、待测样本孔,每孔依次加入稀释后待测样本 100μL,对照孔加入对应对照液 100μL。
一步法酶结合物添加:所有孔直接加入酶标记二抗工作液 100μL,无需洗板,封板膜密封酶标板,轻轻震荡 30s 使孔内液体混匀。
恒温孵育反应:将封好的酶标板放入 37℃恒温孵育箱,避光孵育 60min,全程避免强光直射,中途不可掀开封板膜。
洗板彻底洗涤:揭去封板膜,甩掉孔内废液,每孔加满浓缩洗涤液稀释后的工作洗涤液,浸泡 30s 后拍干,重复洗板 5 次,最后一次在吸水纸上充分拍净残留液体。
底物显色反应:每孔同步加入显色液 A 液 50μL、显色液 B 液 50μL,轻柔震荡混匀,37℃避光显色 15min,严格把控显色时长。
终止读数检测:每孔快速加入终止液 50μL 终止酶促反应,酶标仪设置波长 450nm,5min 内测定各孔 OD 值,记录数据并对照标准曲线计算样本 CAM-ab 浓度。
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