本试剂盒运用间接酶联免疫吸附试验原理，预先将肝素PF4复合物抗原包被在酶标板微孔内，封闭空白位点后加入待测样本，样本中的抗肝素PF4复合物HIT抗体可特异性识别并结合固相上的肝素PF4复合物抗原；洗涤去除未结合杂质后，加入酶标记抗人免疫球蛋白二抗孵育结合，再次洗涤后加入底物催化显色，反应终止后检测吸光度，显色强度与样本中HIT抗体浓度成正比，通过标准曲线换算即可完成定量检测。
基本参数：
产品名称：人抗肝素PF4复合物抗体/HIT抗体(HIT)ELISA试剂盒
英文名称：HIT Elisa Kit
货号：Y-E483
规格：48T/96T
灵敏度：最小检测值 0.06U/mL
检测范围：0.1U/mL～12.8U/mL
反应时间：样本室温孵育 75min；酶标二抗孵育 40min；避光显色 18min
保存条件：全套试剂 2～8℃避光；浓缩试剂稀释后当日用完，不可留存
显色系统：HRP 催化 TMB 显色
检测波长：450nm，可选 600nm 做空白校正
标准曲线绘制：选用四参数拟合，设置空白孔归零，根据标品 OD 对应浓度生成曲线计算样本结果
注意事项：肝素类用药患者样本需备注；微孔板切勿干板孵育；洗涤液稀释用水为去离子纯水
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
样本处理：新鲜血浆样本使用专用稀释液 1:120 稀释，吹打混匀 10 次，静置 6min，脂血样本过滤后再稀释。
布局加样：设置空白、阴性、阳性、待测样本孔，每孔添加稀释样本 100μL，对照孔添加对应质控液 100μL。
一步添加酶标记结合液：直接向全部孔位加入酶标肝素 - PF4 复合物工作液 100μL，封板密封，低速震荡 1min。
孵育结合反应：37℃恒温培养箱密闭孵育 70min，全程避光，防止底物提前分解。
洗板步骤：倒掉孔内液体，洗涤液加满每孔浸泡 40s，拍干，重复洗板 6 次，确保非特异性结合物完全洗脱。
显色启动：依次加显色 A 液、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 18min。
终止测值：加终止液 50μL 终止反应，酶标仪 450nm 读取 OD 值，对照试剂盒临界 Cutoff 值判读样本 HIT 抗体结果。
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