人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将特异性抗人平滑肌肌球蛋白抗体包被于酶标板微孔内，形成固相抗体。检测时，样本、标准品中的人平滑肌肌球蛋白会与固相抗体特异性结合，洗去未结合物质后，加入酶标记的二抗形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤去除游离组分，加入底物液进行显色反应，最后加入终止液终止反应，通过酶标仪测定各孔吸光度值，吸光度值与样本中人平滑肌肌球蛋白的含量呈正相关，以此可精准计算样本中待测指标的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低可检出 0.12ng/mL 样本中 SMM 含量

检测范围：0.35ng/mL～22.4ng/mL

反应时间：样本孵育 65min，二抗孵育 50min，底物显色 18min，终止后立即读数

保存条件：未拆封试剂盒 2～8℃避光密封存放；开封后板条干燥剂封存 2～8℃，有效期 1 个月

显色系统：TMB 单组份显色液，酶促底物显色

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

标准曲线绘制：以标准品浓度为 X 轴，对应 OD 吸光度值为 Y 轴，四参数 Logistic 拟合生成标准曲线

注意事项：血清样本需避免反复冻融超过 2 次；洗板每孔浸泡时长不得低于 30 秒，防止非特异性结合干扰结果
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

提前取出试剂盒所有组分，室温平衡 30min，配制洗涤液、样本稀释液、酶结合工作液；取出预包被 96 孔板，标记样本孔、标准品孔、空白孔。

标准品孔依次加入梯度稀释好的 SMM 标准品 50μL；样本孔加入稀释后待测血清 / 上清样本 50μL；空白孔不加任何液体。

每孔直接加入一步法酶标记抗体工作液 100μL，封板膜密封酶标板，轻轻震荡混匀。

酶标板置于 37℃恒温孵育箱避光孵育 60min，全程避免强光直射。

小心撕掉封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满洗涤缓冲液，静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次拍干孔内残留液体。

每孔现配现加显色底物 A 液、B 液各 50μL，轻柔晃动板子混匀，37℃避光显色 15min。

每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，15min 内使用酶标仪在 450nm 波长读取各孔 OD 值，根据标准品曲线计算样本 SMM 浓度。