本试剂盒依托间接ELISA检测原理,将纯化的麦胶蛋白(麦醇溶蛋白)抗原固定于微孔板表面,作为固相捕获抗原;待测样本中的抗麦胶蛋白抗体可与固相抗原特异性免疫结合,孵育后洗板清除游离杂质;随后加入辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白二抗,与目标抗体结合形成免疫复合物,经充分洗涤后加入底物显色液显色;显色强度与样本中AGA抗体含量呈正相关,终止显色后检测吸光度,通过标准曲线可精准定量样本中目标抗体水平。
基本参数:

产品名称:人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)ELISA试剂盒
英文名称:AGA Elisa Kit
货号:Y-E427
规格:48T/96T
灵敏度:0.2ng/mL
检测范围:0.4ng/mL - 12.8ng/mL
反应时间:第一步孵育 55min,第二步 45min,显色 14min
保存条件:全部组分 2~8℃避光,浓缩洗涤液出现结晶温水化开不影响使用
显色系统:A、B 双组分底物显色
检测波长:450nm,参比 620nm
标准曲线绘制:四参数 Logistic 回归绘制标准曲线,软件自动计算样本浓度
注意事项:乳糜泻患者空腹采血样本结果更稳定;不可混用不同批次试剂盒试剂
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

试剂盒室温放置 22min,取出微孔板条固定于板架,区分空白、对照、样本孔并编号。
样本稀释后每孔加样 100μL,阴性与阳性对照直接加对应试剂 100μL,空白孔不滴加任何液体。
直接向所有非空白孔加入酶标记二抗液 100μL,封板膜密封,轻震酶标板 30 秒混匀。
37℃水浴孵育 40min,保证水浴液面没过板条孔内液面高度。
去除封板,弃液洗板:每孔注洗涤液浸泡 22s 倒掉,洗板 5 次,最后充分拍干微孔。
每孔加入显色 A、B 液各 50μL,避光混匀,室温避光显色 18min。
加入终止液 50μL 终止显色,混匀后酶标仪 450nm 测定吸光度,根据标准曲线定量样本抗体浓度。
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