人抗染色体抗体(anti-chromosome Ab)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附检测原理，微孔板固相包被纯化的人染色体抗原，待测样本中的抗染色体抗体可与固相染色体抗原特异性免疫结合，孵育完成后洗去游离的非特异性物质；加入酶标记抗人二抗，与结合在固相上的抗染色体抗体精准结合，形成稳定的免疫复合物；经洗涤纯化反应体系后，加入底物显色液显色，显色强度对应抗体含量高低，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线即可定量检测样本中anti-chromosome Ab的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人抗染色体抗体(anti-chromosome Ab)ELISA试剂盒

英文名称：AhCGAb    Elisa Kit
货号：Y-E425

规格：48T/96T

灵敏度：0.42IU/mL

检测范围：0.84IU/mL - 26.88IU/mL

反应时间：样本孵育 75min，酶结合物 40min，显色 17min

保存条件：2~8℃冷藏，禁止冷冻板条，冷冻会导致包被抗原失活

显色系统：HRP 催化 TMB 显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：6 点标准品构建四参数曲线，扣除空白本底后计算样本浓度

注意事项：系统性红斑狼疮高发阳性，自身免疫病服药期间结果会受药物干扰
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒试剂室温回温 24min，取出酶标板条固定于板架，区分各类实验孔并编号记录。

稀释后待测样本每孔加样 85μL，阴性对照、阳性对照孔加入对应试剂 85μL，空白孔不添加任何液体。

一步法直接滴加酶二抗工作液 85μL 至全部检测孔，封板膜封口，轻摇酶标板混匀。

37℃水浴条件下孵育 52min，保证水浴液面没过微孔下半部分。

揭膜倒掉孔内液体，洗涤液加满浸泡 30s 弃去，循环洗板 4 次，吸水纸按压吸干微孔残留洗液。

单孔加入显色 A、B 液各 50μL，避光混匀，37℃避光显色 17min。

加入终止液 50μL 终止酶促反应，混匀后 450nm 波长测定 OD 值，对照标准曲线换算抗体含量。
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