人抗人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，微孔板预包被纯化的人类免疫缺陷病毒特异性抗原，待测样本中的HIV抗体可与固相病毒抗原特异性结合，孵育后洗板去除未结合杂蛋白；加入辣根过氧化物酶标记的抗人二抗，与固相上的HIV抗体结合形成免疫复合物，再次洗板清除游离酶标抗体；加入底物进行酶促显色反应，显色深浅与样本中HIV抗体含量呈正相关，终止显色后检测吸光度，通过标准曲线定量分析样本中目标抗体含量。
基本参数‌：

产品名称：人抗人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)ELISA试剂盒

英文名称：HIV  Elisa Kit
货号：Y-E744

规格：48T/96T

灵敏度：符合国标 HIV 抗体检出灵敏度，可检出最低阳转血清稀释度 1:1280

检测范围：定性阴阳性判定，不做精确定量，阳性样本需送确证实验室复核

反应时间：样本孵育 60min，酶结合物 30min，显色 15min

保存条件：2~8℃避光保存，试剂盒属于体外诊断一类耗材，需按生物试剂规范存放

显色系统：TMB 底物显色

检测波长：450nm，参比 630nm

标准曲线绘制：仅设置阴性对照、临界值对照、强阳性对照，不绘制定量标准曲线，以临界值 OD 判定结果

注意事项：操作严格执行生物安全防护；阳性结果仅为初筛，不能作为确诊依据；废弃物高压灭菌处理
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温放置 30min，取出预装包被微孔板，设置空白、阴性对照、阳性对照、待测样本孔并标记。

稀释待测样本加入样本孔 65μL，阴阳性对照孔添加对应对照液 65μL，空白孔不加试剂。

直接向所有加样孔加入酶标记抗原工作液 65μL，封板密封，轻柔震荡酶标板混匀孔内液体。

37℃恒温孵育 68min，孵育期间避免开门频繁造成温度波动。

撕掉封板膜，倾倒废液，洗涤液灌满每孔浸泡 33s 甩干，重复洗板 5 次，彻底拍干微孔水分。

每孔依次添加显色 A 液、B 液各 50μL，避光混匀，37℃避光显色 12min。

快速加入终止液 50μL 终止反应，混匀后 10min 内 450nm 读取 OD 值，参照标准判读阴阳性与抗体浓度。
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