人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，微孔板预包被纯化的神经元核Hu抗原，待测样本中的抗Hu抗体（ANNA-1）可与固相Hu抗原特异性结合，形成稳定的免疫复合物；洗除未结合的游离杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的抗人二抗，与复合物中的ANNA-1/Hu抗体精准结合；再次洗板后加入显色底物进行酶促显色，显色深浅与样本中目标抗体含量正相关，终止显色后检测吸光度，对照标准曲线实现定量分析。
基本参数‌：

产品名称：人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)ELISA试剂盒

英文名称：ANNA-1/Hu  Elisa Kit
货号：Y-E455

规格：48T/96T

灵敏度：临界 OD 值 0.1 判定阳性检出

检测范围：定性检测，阳性血清梯度稀释 1:50~1:1600 半定量参考

反应时间：一抗孵育 95min，酶标二抗 55min，显色 23min

保存条件：试剂盒 2~8℃，阳性对照分装 - 20℃冻存，反复冻融不超过 2 次

显色系统：TMB 显色系统

检测波长：450nm

标准曲线绘制：无定量标准曲线，设置阴、阳、临界值对照孔，依据临界值 OD 判读结果

注意事项：多见于小细胞肺癌副肿瘤神经病变，阳性必须完善全身肿瘤筛查
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 31min，取出酶标板拆分所需板条，标记空白、阴性对照、阳性对照、样本孔。

稀释后待测样本加入对应孔 78μL，阴阳性对照孔加入对照试剂 78μL，空白孔无加样。

直接向所有检测孔加入酶标记抗体工作液 78μL，封板密封，水平震荡酶标板混匀孔内液体。

37℃恒温孵育 54min，酶标板单层平放于孵育箱内。

揭去封板膜，倾倒废液，洗涤液灌满每孔浸泡 27s 甩干，循环洗板 4 次，吸水纸按压吸干微孔。

每孔分别添加显色 A 液、B 液各 50μL，避光混匀，室温显色 17min。

加入终止液 50μL 终止显色反应，混匀后酶标仪 450nm 测 OD 值，对照标准曲线计算抗体浓度。
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