人结肠癌抗原(CCA)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，将人结肠癌抗原特异性抗体包被于微孔板，作为固相捕获载体，待测样本中的CCA抗原可与固相抗体特异性结合；孵育洗涤后加入酶标记CCA检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物；洗去游离酶标抗体后进行底物显色，显色强度与样本中结肠癌抗原含量成正比，通过酶标仪检测吸光度，结合标准曲线即可定量测定样本中CCA含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.18U/mL

检测范围：0.36~23U/mL

反应时间：加样孵育 90min，酶结合物 50min，显色 16min

保存条件：2~8℃密封保存，稀释好的洗涤液 4℃可存放 7 天

显色系统：即用型单液 TMB 显色体系

检测波长：450nm 直接读取吸光值

标准曲线绘制：线性回归绘制标准曲线，依据 OD 值换算抗原浓度

注意事项：胸水腹水样本需离心预处理；试剂盒不同组分严禁交叉污染；终止后 20min 内完成检测
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

整套试剂室温回温 26min，拆分酶标条，区分标准孔、样品孔、空白孔，每孔上样待测稀释液 100μL，空白孔补稀释缓冲液。

直接添加酶结合抗原液 60μL，震荡混匀后覆膜密封。

37℃避光孵育 56min，全程无强光直射。

开封倒掉废液，洗涤液浸润每孔 35s 后拍干，循环洗板 4 次。

加入显色 A、B 液各 50μL，暗处 37℃显色 12min。

滴加终止液 50μL 混匀终止显色。

酶标仪 450nm 检测 OD 值，换算样本 CCA 抗原含量。