人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板预包被人TdT特异性单克隆抗体，孵育过程中样本中的末端脱氧核苷酸转移酶与固相抗体特异性结合，加入酶标记检测抗体形成免疫复合物，充分洗涤后进行底物显色，显色深浅与样本中TdT含量成正比，通过酶标仪读数和标准曲线换算完成定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：0.31 pg/mL

检测范围：2.2pg/mL～98pg/mL

反应时间：样本孵育 90min，酶试剂 43min，显色 16min，总 149min

保存条件：2～8℃避光，核酸相关组分避免高温环境

显色系统：TMB 单液显色终止

检测波长：450nm

标准曲线绘制：7 梯度标准品，非线性拟合曲线

注意事项：实验全程无 DNase 污染，枪头无核酸酶残留
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

样本处理：细胞裂解上清 12000rpm 离心 12min，稀释样本；梯度配制 TdT 标准品系列浓度。

上板加样：酶标板对应孔加入标准品、待测样品、空白对照 100μL。

一步共加酶抗：每孔加入 HRP 标记 TdT 抗体 100μL，密封板膜。

恒温孵育：37℃避光孵育 63min。

洗板流程：倒掉废液，洗液浸泡 25s 拍干，洗板 5 次。

TMB 显色：添加显色 A、B 液各 50μL，避光显色 13min。

终止读数：终止液终止显色，酶标仪 450nm 测值，标准曲线定量 TdT。